甲磺酸帕珠沙星注射液人体药动学研究

              作者：沈奇 梁德荣 苗佳 余勤 梁茂植 徐楠 郑莉 罗柱 吴松泽

【摘要】  目的 研究单次及多次静脉滴注甲磺酸帕珠沙星注射液的药动学特点。方法 筛选健康受试者12名，q12h静脉滴注甲磺酸帕珠沙星注射液每次500mg，连续5d，共9次；用反向高效液相色谱?紫外法测定血药浓度，用DASver1.0软件拟合药动学参数。结果 受试者静脉滴注甲磺酸帕珠沙星注射液后体内过程符合二室模型；单次给药后的药动学参数：Tmax为(0.47±0.09)h，cmax为(13.71±1.81)mg/L，AUC0-t为(24.60±4.15)mg·h/L，t1/2为(1.46±0.64)h，MRT、CL和Vd分别为(2.14±0.33)h、(0.09±0.04)L/(h·kg)和(0.17±0.03)L/kg。q12h静脉滴注帕珠沙星500mg连续5d(共9次)，第2、3、4、5d晨测得谷浓度分别为0.13、0.16、0.17和0.14mg/L，提示血药浓度已达稳态。末剂给药后的药动学参数：Tmax为(0.48±0.10)h，cmax为(15.41±1.67)mg/L，AUC0-t为(28.42±4.90)mg·h/L，t1/2为(1.33±0.49)h，CL为(0.09±0.06L/)h，(css)av为(2.34±0.43)mg/L，DF为(99.48±0.38)%，以上参数与单次给药比较除cmax外均无统计学差异，且累积系数小，说明本品多次给药无体内蓄积。女性和男性受试者主要药动学参数比较均无统计学差异。受试者给药期间未出现严重不良反应。结论 500mg q12h静脉滴注，在人体内可达到有效血药浓度，可以作为临床应用的推荐方案。

【关键词】  甲磺酸帕珠沙星； 反向高效液相色谱?紫外法； 药动学

　　Study on pharmacokinetics of pazufloxacin mesylate injection　in healthy volunteers

　　ABSTRACT  Objective  To investigate the pharmacokinetics of pazufloxacin mesylate injection after single and multiple?doses intravenously.  Methods  Twelve healthy volunteers were administrated 500mg pazufloxacin mesylate twice a day for 5 days. The plasma concentrations were determined by RP?HPLC?UV method and the pharmacokinetic parameters were calculated by DASver1.0 software.  Results  The pharmacokinetics of pazufloxacin is fit to two compartment model. The pharmacokinetic parameters after single administration: Tmax was (0.47±0.09)h, cmax was (13.71±1.81)mg/L, AUC0-t was (24.60±4.15)mg·h/L, t1/2 was (1.46±0.64)h, MRT was (2.14±0.33)h, CL was (0.09±0.04)L/(h·kg) and Vd was (0.17±0.03)L/kg. The pharmacokinetic parameters after successive administration: Tmax was (0.48±0.10)h, cmax was (15.41±1.67)mg/L, AUC0-t was (8.42±4.90)mg·h/L, t1/2 was (1.33±0.49)h, CL was (0.09±0.06)L/h, (css)av was (2.34±0.43)mg/L, DF was (99.48±0.38)%. There were no significant differences in all pharmacokinetic parameters except cmax between the first and the last administraion of pazufloxacin and cumulation coefficient was very small. It suggested that there was no accumulation after successive administration. No serious adverse effect was observed in volunteers.  Conclusion  Effective concentration in vivo could be achieved after intravenous infusion of 500mg pazufloxacin mesylate twice a day and there may have no accumulation in human body for 5 days administration. The dosing schedule was recommended.
   
　　KEY WORDS  Pazufloxacin mesylate;  RP?HPLC?UV;  Pharmacokinetics

　　甲磺酸帕珠沙星为新一代氟喹诺酮类抗菌药物，其作用机理为抑制DNA拓扑异构酶，使细菌DNA无法形成超螺旋结构，导致细菌细胞无法分裂和增殖而死亡。本品不仅对革兰阳性菌(如葡萄球菌属、肺炎链球菌、化脓性链球菌、溶血性链球菌、肠球菌属等)和革兰阴性菌(如大肠埃希菌、克雷伯菌属、沙雷菌属、不动杆菌属、变形菌属、铜绿假单胞菌、流感嗜血菌、淋球菌等)抗菌力强，并且对厌氧菌、支原体、衣原体有较好的抗菌活性。本品渗透性强，血药浓度高，主要以原型从尿中排泄。由于该药分子结构中C?7位引入了氨基环丙基，不良反应(尤其中枢神经系统毒性和光毒性)比同类品种明显降低［1］。本品注射剂由日本富山化学和三菱公司研制开发，并于2002年4月在日本获准上市，临床资料表明该品对中重度呼吸道、泌尿生殖道、腹腔、皮肤软组织等细菌感染疗效确切［2，3］。本研究拟进行甲磺酸帕珠沙星注射液在健康人体的药动学试验。

　　1  材料、对象和方法

　　1.1  受试者选择
   
　　12例自愿受试者，男女各半，年龄21～27岁，身高158～174cm，体重51～71.5kg，体重指数19.81～23.89，健康体检正常。受试者均符合纳入标准并签署知情同意书。试验方案经四川大学华西伦理委员会批准通过。

　　1.2  试验药品和试剂
   
　　甲磺酸帕珠沙星氯化钠注射液(每瓶100ml，含帕珠沙星0.5g与氯化钠0.9g)由成都市药友科技有限公司和重庆莱美药业有限公司研制提供，批号030701。帕珠沙星标准品由成都市药友科技发展有限公司提供，纯度99.7%，批号960817。内标用盐酸芦氟沙星对照品由由成都市药友科技发展有限公司提供，纯度99.7%，批号为960817。试验所用试剂除乙腈和二氯甲烷为色谱纯外，其余均为分析纯，纯净水由Millipore RiOsTM型纯水器制备。

　　1.3  研究方法
   
　　受试者试验期间均入住Ⅰ期病房，试验全程在医护人员监护下进行。受试者静脉滴注甲磺酸帕珠沙星500mg/100ml(采用输液泵控制静脉滴注速度，时间30min)，每日2次，间隔12h，连续5d，d5清晨只给药1次，共给药9次。由于本品为静脉注射剂，给药前勿需禁食、限水，受试者于试验前日晚进食低脂饮食，给药前0.5h统一用低脂标准早餐(含水400ml)。每例受试者于第1次给药前抽取空白血样3ml，并于开始给药后0.17、0.33、0.5、0.58、0.67、0.83、1.0、1.25、1.5、2.0、3.0、5.0、8.0和12.0h各采静脉血3ml，共15次。在d2、d3、d4晨给药前抽取血样3ml，用于检测药物谷浓度；d5于开始给药前、给药后0.17、0.33、0.5、0.58、0.67、0.83、1.0、1.25、1.5、2.0、3.0、5.0、8.0和12.0h各采静脉血3ml，共15次。血样均经肝素抗凝，离心分取血浆后置-30℃低温冰箱存放备测。
   
　　受试期间禁止剧烈活动，禁止吸烟，禁止饮茶、饮酒及饮用含酒精、咖啡因或碳酸类饮料，试验期间禁用一切非试验药物。

　　1.4  血样检测方法
   
　　(1)仪器与色谱条件  采用日本Shimadzu公司LC?2010CHT系列HPLC仪，含系统控制器，四元低压梯度输液泵，全自动进样器，柱恒温箱，可变波长紫外检测器，ClassVP色谱数据工作站。选用YMC C18(150mm×4.6mm，5μm)色谱柱(柱温35℃)，用CH3CN∶0.025mol/L NaAc(HAc调pH2.60)(13∶87)流动相洗脱，流速1ml/min。紫外检测波长249nm。
   
　　(2)标准曲线制备及线性  取空白血浆0.2ml共8份，分别加入0.1ml甲磺酸帕珠沙星标准系列工作液，再加入0.1ml内标工作液(含芦氟沙星500ng)，旋涡混匀，加入0.2ml 0.02mol/L磷酸盐缓冲液(pH8.0)，旋涡混匀后加入3ml二氯甲烷萃取液，旋涡萃取8min，离心10min(2500r/min)，抽弃上层液，将下层二氯甲烷液转移至尖底玻璃试管内，置38℃水浴中通空气流挥干，残渣溶于0.15ml流动相，漩涡混匀5min，分装入全自动进样器，进样0.1ml。记录帕珠沙星和内标的色谱峰高，以两者的峰高比(Y)对应其浓度(X)进行线性回归，得帕珠沙星血浆浓度标准曲线回归方程：Y=0.4135X-0.0409  r=0.9999帕珠沙星血药浓度在0.078～20mg/L范围与峰高比之间有良好线性关系。
   
　　(3)方法特异性及最低定量限  空白血浆、帕珠沙星和内标对照品、加帕珠沙星和内标的血浆及受试者血浆样品进行色谱分析(图略)，帕珠沙星及内标芦氟沙星的保留时间分别为5.2和4.3min(另有一内标洛美沙星，保留时间为6.4min，但最终以芦氟沙星的峰高比求出待测帕珠沙星的浓度)，帕珠沙星的最低定量限为0.078mg/L。
   
　　(4)方法精密度  取用空白血浆配制的帕珠沙星高、中、低三种浓度的样品，按“标准曲线制备”项下操作，以药物和内标的峰高比在标准曲线上求出帕珠沙星浓度，于同一日内每一浓度测定5个样品，计算日内RSD为7.75%～12.04%；于不同日测定每一浓度样品，计算日间RSD为4.48%～6.23%。
   
　　(5)方法回收率  取用空白血浆配制的帕珠沙星高、中、低三种浓度的样品0.2ml各5份，按“标准曲线制备”项下操作测定含量，计算方法回收率为95.07%～100.51%。
   
　　(6)萃取回收率  取用空白血浆配制的帕珠沙星高、中、低三种浓度的样品各0.2ml，按“标准曲线制备”项下操作后进样，同时配制绝对进样量相当于各浓度100%含量的对照品工作液直接进样，用处理后样品的帕珠沙星峰高与直接进样的峰高比较，计算萃取回收率为66.76%～72.76%；内标芦氟沙星的萃取回收率为88.21%。

   
　　(7)药动学参数处理  采用DASver1.0药动学程序处理500mg首次和多次给药的血药浓度药?时变化数据，分析单次给药数据所符合的模型，求出主要药动学参数，包括ka、cmax(实测值)、Tmax(实测值)、AUC(梯形法计算)、Vd、Kel、t1/2、CL、(css)max、(css)min、(css)av、DF和R等药动学参数，对多次给药的药动学、特点及与剂量的相关性进行初步讨论；并对首剂和末剂给药后的血药浓度经时变化数据进行比较。

　　2  结果

　　2.1  血药浓度?时间曲线
   
　　12例受试者单次及多次静脉滴注甲磺酸帕珠沙星500mg后均值血药浓度?时间曲线见图1。

　　2.2  药动学参数
   
　　(1)主要药动学参数  根据DASver1.0药动学程序处理分析，得出12例受试者单次及多次静脉滴注甲磺酸帕珠沙星500mg后的药动学参数(表1)。试验中测定的24h、48h、72h、96h连续4d晨血药谷浓度分别为(0.13±0.08)、(0.16±0.07)、(0.17±0.10)和(0.14±0.06)mg/L，其间无显著性差异，均稳定在小于峰浓度1/30的范围内，故可以认为末剂给药后测定的96～108h的经时血药浓度数据为稳态血药浓度?时

　　图1    略

　　表1    单次、多次给药主要药动学参数均值的比较　略
   
　　(2)单次及多次给药的药动学比较  将单次给药后所得经时血药浓度数据求算的药动学参数与稳态血药浓度时间数据求算的药动学参数进行成对t检验比较，结果显示多次给药的cmax高于单次给药，且有统计学意义，但Tmax、t1/2β、AUC(0-t)、AUC(0-∞)、V/F、CL、MRT等药动学参数比较均无统计学差异，且累积系数小，说明本品多次给药物无体内蓄积(表1、图2)。
   
　　本品消除半衰期约为1.46h，应间隔12h给药一次(即间隔约8个消除半衰期给药一次)，可以认为前次给药量的约99%已被消除。本研究中q12h多次给药达稳态后的(css)max为(15.48±1.68)mg/L，与单次给药所得cmax［(13.71±1.81)mg/L］和多次给药所得cmax［(15.41±1.67)mg/L］比较，均无统计学差异；(css)min为(0.13±0.09)mg/L， 与d2、d3、 d4、d5晨的

　　图2    略
   
　　(2)男、女受试者的药动学比较  受试者单次和多次静脉滴注甲磺酸帕珠沙星500mg，主要药动学参数男女比较均无统计学差异(表2、3)。

　　2.3  安全性评价
   
　　静脉滴注甲磺酸帕珠沙星的12例受试者中，3例出现局部轻度疼痛，未予特殊处理，静脉滴注结束后均自行缓解，其中1例在最后一次静脉滴注结束后出现静脉炎表现，予以局部热敷处理，2d后完全好转，上述不良反应与药物很可能有关。试验结束后，12例受试者复查血、尿常规，肝、肾功能及心电图均正常。

　　3  讨论
   
　　甲磺酸帕珠沙星是新型氟喹诺酮类抗菌药物，对革兰阴性菌、革兰阳性菌及厌氧菌、支原体、衣原体均有较好的抗菌活性， 且中枢神经系统不良反应及光毒

　　表2      受试者单次给药主要药动学参数的比较　略
   
　　表3      男女受试者多次给药主要药动学参数的比较　略
   
　　本研究采用反相高效液相色谱?紫外检测法(RP?HPLC?UV)，以盐酸芦氟沙星为内标，测定血浆中帕珠沙星的浓度，结果表明单次静脉滴注甲磺酸帕珠沙星注射液500mg，主要药动学参数与国外报道相近［4］。每日2次静脉滴注帕珠沙星500mg连续5d，d2、d3、d4、d5晨测得的谷浓度分别为0.13、0.16、0.17和0.14mg/L，提示d2已达稳态。多次与单次给药所得药动学参数比较除cmax外均无统计学差异，且累积系数小，说明本品多次给药无体内蓄积。女性和男性受试者主要药动学参数比较均无统计学差异。少数受试者给药期间出现轻度局部疼痛或静脉炎表现。
   
　　据报道，帕珠沙星对MSSA和MSSE的MIC90均为0.39μg/ml，对大肠埃希菌、志贺菌属、沙门菌属、异型柠檬酸杆菌、奇异变形菌、普通变形菌、流感嗜血菌、摩根菌的MIC90均小于或等于0.05μg/ml；对肺炎克雷伯菌、淋球菌、黏膜炎莫拉菌、斯氏普罗威登斯菌的MIC90均为0.10μg/ml；对阴沟肠杆菌、弗氏柠檬酸杆菌、雷极普罗威登斯菌的MIC90分别为0.20、0.39和0.78μg/ml［5］。研究结果显示，每日2次静脉滴注甲磺酸帕珠沙星500mg的(css)av为(2.3422±0.4286)mg/L，对临床大多数常见致病菌均有效。本试验结果表明，500mg每日2次静脉滴注，在人体内可达到有效血药浓度，可以作为临床应用的推荐方案。

【文献】
  　　［1］ Kobayashi H. Interim results from a multicentre clinical trial of T?3761 in Japan ［J］. Drug,1995,49(Suppl 2):470

　　［2］ Shimada K. Optimal clinical dose of pazufloxacin mesilate in respiratory tract infection or complicated urinary tract infection ［J］. 日本化学疗法学会杂志，2002，50(7)：435

　　［3］ 鲍永霞，邵玉霞，吕福祯，等. 甲磺酸帕珠沙星呼吸道和泌尿道细菌性感染的多中心双盲随机对照临床研究［J］. 抗生素杂志，2005，30(10)：624

　　［4］ 中岛，光好梅村，和夫小管，等. Pazufloxacin 注射液的临床第Ⅰ相试验［J］. 日本化疗法学会杂志，1999，47(Supple 1)：141

　　［5］ Muratani T, Inoue M, Mitsuhashi S. In vitro of T?3761,a new fluoroquinolone ［J］. Antimicrob Agent Chemother,1992,36(10):2293