正交试验法优化水飞蓟素固体脂质纳米粒的处方
【关键词】 固体脂质纳米粒；水飞蓟素；制备工艺；
摘要：目的：为提高水飞蓟素的疗效，以硬脂酸为载体材料制备水飞蓟素固体脂质纳米粒。方法：利用“乳化蒸发低温固化”法制备水飞蓟素固体脂质纳米粒，采用正交试验设计的方法筛选出最优处方。结果：固体脂质纳米粒基本呈圆球状或椭圆球状，大小比较均匀，生物数码显微镜测定粒径（245±100）nm。结论：硬脂酸纳米粒可做为水飞蓟素药物载体制成制剂。
关键词：固体脂质纳米粒；水飞蓟素；制备工艺；
正交试验设计水飞蓟素（silymarin，SILY）是从菊科植物水飞蓟的果实经提取精制而得到的黄酮木脂素类化合物，为类白色结晶性粉末，无臭，味微苦，有吸湿性。溶于丙酮、乙酸乙酯，略溶于甲醇、乙醇，难溶于氯仿，不溶于水。SILY对急慢性肝炎、肝硬变和代谢中毒性肝损伤有较好疗效，但由于水飞蓟素难溶于水，生物利用度低，制备理想液体制剂较困难。如将其制成注射剂需采用非水溶媒，但制成的注射液加水稀释至含水量占75%以上时出现混浊，因此只可肌肉注射，不宜静脉注射。
固体脂质纳米粒（solid lipid nanoparticles，SLN）系指以生理相容的高熔点脂质为骨架材料制成的纳米粒。它一方面可以因药物被载体携带而增加药物的溶解度，从而增加药物的生物利用度；另一方面它对肝脏和肾脏等网状结构的脏器具有靶向性。选择天然脂质材料硬脂酸为药物载体，制成水飞蓟素固体脂质纳米粒（silymarin solid lipid nanoparticles，SILYSLN）可因药物被载体携带，分散在水中形成近似胶体溶液。同时用Poloxamer188及磷脂为表面活性剂，使之吸附在SILYSLN上，用于静脉注射，可靶向肝脏部位，有利于提高药物疗效降低药物毒副作用。本实验选用水飞蓟素作为模型药，采用正交试验设计法考察吐温80、十八醇、PoloxamerF68、磷脂各因素对SLN的综合影响并优选出较优处方，并将其制成固体脂质纳米粒。
1仪器设备与材料
WFZ800D2型紫外可见分光光度计（北京第二仪器厂）；JY922D型超声细胞粉碎机； DF101T集热式恒温加热磁力搅拌器 （巩义市英峪予华仪器厂）；TG328B电光分析天平（上海天平仪器厂）；Nanomizer System YSNM1500（CONTROL UNIT YOSHIDA）。水飞蓟素（实验室提供）；硬脂酸（天津市博迪华工有限公司）；大豆磷脂（供注射用 上海大伟药业有限公司 批号 020718）；Poloxamer188 （南京金陵石化公司表面活性剂研究所 药用规格）无水乙醇（分析纯）；十八醇（沈阳市新西试剂厂）；吐温80（大连市医药集团公司）；十二烷基硫酸钠 （沈阳市东兴制药厂）。
2实验方法
21SILYSLN处方依据
211制剂中主药含量的确定根据中的报道及制剂中SILY用量, 确定每次投药量0.03g。硬脂酸含量0.1g。
212处方筛选采用单因素考察及文献资料,选用吐温80、十八醇、PoloxamerF68、磷脂作为表面活性剂，硬脂酸作为载体。确定了表面活性剂和载体的用量范围,最后利用正交试验设计法确定处方的组成。
2121正交试验因素及水平在主药含量固定不变的前提下，将吐温（A）、十八醇(B)、poloxamer(C)及磷脂(D)用量作为考察因素，每个因素选取3个水平, 同时考察因素A与因素B的交互作用,选用正交试验设计表L18(37)安排实验。以通过0.8μm微孔滤膜物质量（满分10分）、0.45μm微孔滤膜的物质量（满分10分）、透明度（满分20分）、分层程度（满分10分） (总分50分) 为判断指标,评价处方的优劣。具体实验安排见表1，2。
由可得：SSA×B=SS3+SS4=14.8+4.8=19.6； SSE=SS7=168.8
又因为因素A、A×B、D的均方比误差列的均方要小,所以将其合并为误差列中：
SSE=SS1+SS3+SS4+SS6+SS7=90.8+14.8+4.8+98.8+168.8=378 。选择溶剂乳化法，乳化分散低温固化方法，乳化分散法对SILYSLN的制备工艺进行了研究，结果以乳化分散低温固化法较好。经过单因素考察和正交试验设计优选，确定较优制备工艺为：取水飞蓟素、硬脂酸和无水乙醇10ml加入100ml小烧杯中，微热振荡使充分溶解，加入处方量的卵磷脂，微热再加入处方量十八醇及吐温使成有机相；另取Poloxamer188溶于30ml水中构成水相，将有机相在（1000r・min-1）搅拌下逐滴注入（75±2）℃的水相中，继续搅拌，使有机溶媒完全蒸发，并使体系浓缩至约10ml。将所得的半透明体系搅拌下（1000r・min-1）快速混于另一60ml水相中，继续搅拌1hr，即得硬脂酸纳米粒胶体混悬液，即为SILYSLN。
3实验讨论
本研究针对溶剂乳化法及乳化蒸发低温固化方法进行比较，其中溶剂乳化法含有较大量有机溶剂，若用作静脉注射会产生过敏反应，其次形成粒子粒径远远大于1μm，不符合SLN粒径要求。乳化蒸发低温固化方法较为理想，所得硬脂酸纳米粒稳定性好，不发生沉降。
实验中发现，乳化剂的种类及用量对硬脂酸纳米粒粒径有较大影响，于是选择多种乳化剂 混合使用。粒径会随磷脂、Poloxamer用量的增加而减少，但乳化剂用量过多，使液体过于粘稠，延缓纳米粒中药物的释放。 而吐温80作为静脉注射表面活性剂，有较强的溶血作用，其用量一定得以控制于3%以下。
另外，温度对硬脂酸纳米粒粒径亦有影响。当温度高于表面活性剂的相转变温度时，制得的SLN更稳定，一般控制在70℃以上，因为此时磷脂的脂肪酸链能自由伸展，更充分地发挥作用。
有机溶剂无水乙醇及蒸馏水的用量对粒径的影响不大。无水乙醇最终要蒸发除去，由于乙醇可以作为药物溶剂使用，所以不需做残留溶剂检查。蒸馏水用量影响药物浓度，本实验确定浓度为约0.5mg/ml。
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