杜仲不同提取部位对肾阳虚小鼠抗氧化和抗抑郁作用的影响
作者：吕圭源 陈素红 苏洁 颜美秋 范景 张益勋 方哲 张伟
【摘要】 目的］观察杜仲三个部位对肾阳虚小鼠的抗氧化和抗抑郁作用，为认识杜仲“甘温，入肝、肾经”药性的内涵提供药效学基础。［方法］ ICR雄性小鼠，随机分为正常对照组，模型对照组，桂附地黄丸组，杜仲水部位组、正丁醇部位组、乙酸乙酯部位组。采用腹腔注射苯甲酸雌二醇造成小鼠肾阳虚模型。对小鼠抗氧化指标（SOD、GSH?Px、CAT活性及MDA含量）、抗抑郁指标（悬尾、MAO活性）、疲劳指标等进行测定。［结果］抗氧化指标：杜仲三个部位都能降低MDA含量、提高SOD活性，杜仲水部位和正丁醇部位能提高CAT活性，杜仲水部位和乙酸乙酯部位能提高GSH?Px活性。抗抑郁指标：杜仲乙酸乙酯部位能提高小鼠悬尾活动时间，杜仲三个部位均能抑制MAO活性。杜仲三个部位都能提高小鼠奔跑时间和距离。［结论］杜仲可改善肾阳虚衰引起的衰老和抑郁，其抗氧化和抗抑郁作用可认为是其“甘，温，归肝、肾经”主要药效群的组成部分。杜仲水部位和正丁醇部位的药效较类似，可能是其主要的药效群物质基础。
【关键词】 杜仲；肾阳虚；甘温；肝经；肾经
杜仲味甘，性温，归肝肾经，功能补肝肾、强筋骨、安胎［1］。我们前期药理研究发现，杜仲可通过提高肾阳虚小鼠抓力、肛温、游泳时间、自主活动、睾丸和精囊腺指数，降低血清肌酐、尿素，改善血液学指标，从而改善肾阳虚证之腰膝酸软、性欲减退、畏寒肢冷、精神萎靡、阳虚水泛，以及肾精亏虚、肝气虚弱所致的血液亏虚［2］。《神农本草经》曰杜仲“主腰脊痛，补中益精气，坚筋骨，强志……久服轻身耐老”。因其能为“强志”和“轻身耐老”，故观察其在抗氧化和抗抑郁方面的作用，并进一步探讨其性、味、归经在功能方面的现代科学内涵。
1 材料和仪器
1.1 药物 盐杜仲，批号080110，购自浙江中医药大学中药饮片厂，经鉴定为杜仲科植部位杜仲Eucommia ulmoides Oliv.树皮的炮制品。取药材用10倍体积95%乙醇2次，分别制成乙酸乙酯部位、正丁醇部位，再用10倍体积水提取2次制成水部位。水、正丁醇、乙酸乙酯部位分别加吐温-80稀释至0.125g生药/ml。
1.2 试剂 超氧化物歧化酶、谷胱胺肽过氧化酶、过氧化氢酶、单胺氧化酶、丙二醛试剂盒（SOD、GSH?PX、CAT、MAO、MDA，南京建成生物工程研究所，批号20081009）。苯甲酸雌二醇（上海通用药业股份有限公司，批号070905）。桂附地黄丸（兰州太宝制药有限公司，批号80080542）。
1.3 动物 ICR小鼠，雄性，体重18～22g，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，合格证号: SCXK(沪)2007-0005。
1.4 仪器 YLS?18A小鼠悬尾测试仪（山东省医学科学院设备供应维修站）；YLS?10A小鼠转轮式疲劳仪（山东省医学科学院设备供应维修站）；酶标仪（美国Bio?TEK公司，Power Wave 340）。
2 方法
2.1 造模与给药 健康ICR雄性小鼠72只，随机分为对照组，模型组，桂附地黄丸组，杜仲水部位组、正丁醇部位组、乙酸乙酯部位组，共6组，每组12只。除对照组，其余5组腹腔注射0.4mg/ml的苯甲酸雌二醇大豆油稀释液，每日1次，连续13d，造成肾阳虚模型［2］，体积为0.1ml/10g体重。各受试药组给予相应的药物0.125g生药/ml，桂附地黄丸组给予0.15g生药/ml桂附地黄丸混悬液，对照组和模型组给予0.4%吐温-80，灌胃给药，每日1次，连续30d，体积为0.1ml/10g体重。
2.2 指标检测 期间观察以下指标：抗氧化指标：SOD活性、GSH?PX活性、CAT 活性、MDA含量的测定：方法参照试剂盒说明书。抗抑郁指标：平行测试各小鼠悬尾6min内的总活动时间和活动时间比；MAO测定：方法参照试剂盒说明书。平行测试各小鼠在转棒式疲劳仪（参数：20转/min、电击电流量为0.25mA、电击持续时间为2.5s）上的奔跑时间及奔跑距离。
2.3 统计分析 数据以x± s表示，组间比较采用t?test检验。
3 结果
3.1 杜仲不同部位对雌二醇致肾阳虚小鼠的抗氧化作用
3.1.1 对雌二醇致肾阳虚小鼠肝脏抗氧化酶SOD、GSH?PX和CAT活性的影响 与对照组比较，模型组肝脏抗氧化酶SOD、GSH?PX和CAT活性均明显降低（P<0.01）；与模型组比较，杜仲水部位组能显著提高肾阳虚小鼠肝脏SOD、GSH?PX和CAT的活性，正丁醇部位组能明显提高SOD和CAT的活性，而乙酸乙酯部位组能显著提高SOD和GSH?PX的活性（P<0.05～0.01）。结果说明杜仲能改善肾阳虚小鼠抗氧化酶的水平，见表1。
表1 对肾阳虚小鼠肝脏抗氧化酶SOD、GSH?PX和CAT活性的影响（略）
与正常对照组比较,△P<0.05，△△P<0.01；与模型对照组比较*P<0.05，**P<0.01
3.1.2 对雌二醇致肾阳虚小鼠肝脏脂质过氧化产物MDA的影响 与对照组比较，模型组肝脏脂质过氧化产物MDA明显增加（P<0.01）；与模型组比较，杜仲水部位组、正丁醇部位组和乙酸乙酯部位组均能减少肾阳虚小鼠肝脏脂质过氧化产物MDA（P<0.05～0.01），表明杜仲能减少肾阳虚小鼠过氧化脂质的产生，见表2。
3.2 杜仲不同部位对雌二醇致肾阳虚小鼠的抗抑郁作用 与对照组比较，模型组总活动时间、总活动时间比明显减少，而肝脏MAO活性显著提高（P<0.05～0.01）； 与模型组比较， 杜仲乙酸乙酯部位组能明显增加肾阳虚小鼠悬尾6min内的总活动时间和活动时间比（P<0.05），杜仲水部位组、正丁醇部位组和乙酸乙酯部位组均能抑制肾阳虚小鼠肝脏MAO活性（P<0.05～0.01）。表明杜仲对肾阳虚小鼠具有一定的抗抑郁作用，见表3。
表2 对肾阳虚小鼠肝脏抗MDA含量的影响（略）
与正常对照组比较,△P<0.05，△△P<0.01；与模型对照组比较*P<0.05，**P<0.01
表3 对肾阳虚小鼠悬尾时间及MAO活性的影响（略）
与正常对照组比较，△P<0.05，△△P<0.01；与模型对照组比较*P<0.05，**P<0.01
3.3 杜仲不同部位对雌二醇致肾阳虚小鼠抗疲劳能力的影响 与对照组比较，模型组在转棒式疲劳仪上的奔跑时间和奔跑距离明显减少（P<0.01）；与模型组比较，杜仲水部位组、正丁醇部位组和乙酸乙酯部位组的奔跑时间和距离都显著增高（P<0.01）。结果说明杜仲具有增强肾阳虚小鼠体力、缓解疲劳的作用，见表4。
表4 对肾阳虚小鼠抗疲劳能力的影响（略）
与正常对照组比较，△P<0.05，△△P<0.01；与模型对照组比较*P<0.05，**P<0.01
4 讨论
肾为先天之本，内寓真阴真阳，为脏腑阴阳之本，肾虚则各脏腑皆虚，最易导致疾病和衰老。张景岳将早衰归之于肾阳虚，认为“肾阳衰则亡身之渐”，在其《类经附翼·大宝论》中指出“得阳则生，失阳则死，阳衰者，即亡阳之渐也”。 肝主疏泄，调畅气机，主藏血而为血海，随年龄增长，肝气日衰，肝血日虚，疏泄不利，则性情多异，血不荣筋，筋弱无力，行动迟缓易疲劳而呈老态［3］。肾在志为恐，若肾阳不足，肾气不固，则心无所依，神无所归，虑无所定，出现惊恐胆怯，活动降低，久则可出现郁证。
结果表明，杜仲水部位、正丁醇部位和乙酸乙酯部位都可不同程度的增强SOD、GSH?PX、CAT活性，减少MDA含量，通过抗氧化作用，使机体的各项生命体征得到改善，从而发挥其延缓衰老的作用；都能延长肾阳虚小鼠奔跑时间和距离，从而增强抗疲劳能力。这可能是因为杜仲味甘性温，入肝肾经，可补肾阳、填肾精、调肝气、益肝血，从而改善由肾阳虚衰所致衰老。杜仲水部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位均能降低MAO活性，杜仲乙酸乙酯部位能改善小鼠悬尾试验指标。这可能是由于杜仲味甘性温入肝、肾经，可温肾阳、进而振心阳；升发肝气；温补肾阳，从而改善肾阳虚引起的抑郁症状。结果说明，抗衰老和抗抑郁可认为是杜仲“甘，温，归肝、肾经”主要药效群的主成部分。
另结果显示，杜仲水部位和正丁醇部位的药效较类似，可认为水部位和正丁醇部位可能是杜仲主要的药效群物质基础及化学部位的关系。
【】
1］ 南京中医药大学.中药大辞典(上卷)［M］.上海:上海技术出版社，2006:1514.
［2］ 范景，吕圭源，李恒辉，等.杜仲提取物对雌二醇致肾阳虚小鼠的影响［J］.浙江中西医结合杂志，2009，19(1):1?4.
［3］ 印会河，童瑶.中医基础理论［M］.北京:人民卫生出版社，2007:429?431.
