头孢硫脒与头孢硫脒盐药动学及相对生物利用度研究

                 作者：张小娜 鲁澄宇 陈方 许卫铭 李忠思 吴铁

【摘要】  目的 研究家兔肌注头孢硫脒和头孢硫脒盐的药动学及相对生物利用度。方法 健康家兔12只，随机分为2组，分别肌肉注射等摩尔药物，以高效液相色谱法测定血药浓度，以Matlab程序分析药动学参数及相对生物利用度，判断两种制剂的生物等效性。结果 头孢硫脒和头孢硫脒盐的平均血药峰浓度(cmax)分别为(0.106±0.034)和(0.075±0.019)mmol/L，曲线下面积(AUC)分别为(6.887±1.660)和(6.293±0.707)mmol·min/L，达峰时间(Tmax)分别为(9.697±1.753)和(10.758±3.196)min，血浆清除半衰期(T1/2)分别为(39.908±10.532)和(51.547±9.383)min。两种制剂的药?时曲线吻合良好，所得主要药动学参数经统计学处理，P值均>0.05，无显著性差异，头孢硫脒与头孢硫脒盐比较的相对生物利用度为109.4%。结论 头孢硫脒与头孢硫脒盐为生物等效制剂。

【关键词】  头孢硫脒； 头孢硫脒盐； 高效液相色谱法； 相对生物利用度

    ABSTRACT  Objecdive  To study pharmacokinetics and relative bioavailability of cefathiamidine and cefathiamidine salt in rabbit intramuscularly.  Methods  12 healthy rabbit were randomilzed divided into 2 groups and administered equal dosage of drug. The plasma concentrations of cefathiamidine and cefathiamidine salt were measured by high performance liquid chromatography (HPLC). Pharmacokinetics parameter and relative bioavailability were calculated by Matlab procedure, to judge bioequivalence of two preparations. Results  Pharmacokinetics parameter of cefathiamidine and cefathiamidine salt were as follows: cmax (0.106±0.034)mmol/L and (0.075±0.019)mmol/L, AUC (6.887±1.660)mmol·min/L and (6.293±0.707) mmol·min/L, Tmax (9.697±1.753)min and (10.758±3.196)min, T1/2(ke) (39.908±10.532)min and (51.547±9.383)min. Drug?time curve of two preparations were well coincidence. No significance difference were found among pharmacokinetics parameters of two preparations. The relative bioavailability of two preparations was 109.4%.  Conclusion  The two preparations presented bioequivalence.

    KEY WORDS  Cefathiamidine;  Cefathiamidine salt;  HPLC;  Relative bioavailability

    头孢硫脒(cefathiamidine)是目前唯一由我国自行研制并首先应用于临床的半合成头孢菌素衍生物，临床上主要用于敏感菌引起的呼吸道感染、创伤及外科感染、皮肤及软组织感染、尿路感染、耳鼻喉感染、心内膜炎和败血症，尤其适用于金葡菌、表葡菌、链球菌属或肠球菌等革兰阳性球菌引起的各种中、 重度感染的［1，2］。本品药动学参数优于大多数第一代头孢类抗生素，血药浓度高，组织分布广，主要以原形从尿中排出［2，3］。但头孢硫脒的药动学过程及生物利用度是否优于其盐，选择头孢硫脒制剂是否优于头孢硫脒盐，目前尚未见报道。本研究着重比较头孢硫脒和头孢硫脒盐的药动学参数，并评价两种制剂的生物等效性，为该产品合成工艺优化，产品成本降低，制剂选择的合理性等提供理论依据。

    1  材料和方法

    1.1  试药及试剂

    注射用头孢硫脒(cephathiamidine，商品名：仙力素)，批号3060012，含量98.4%；头孢硫脒标准对照品，批号050110090，含量98.3%；头孢硫脒盐标准对照品，含量98.0%；上述药品均由广州白云山制药股份有限公司广州白云山制药总厂提供。甲醇、乙腈为色谱纯；水为重蒸馏水；三氯乙酸、磷酸二氢钠、柠檬酸为分析纯。

    1.2  仪器

    惠普HP?1100高效液相系统。北京医用离心机厂生产的LD5?10B型离心机；江西医疗器械厂生产的YKH?E型液体快速混合器。

    1.3  动物

    家兔，体重2.0～3.0kg，雌、雄各半，由广东医学院动物部提供，合格证号GB14922.1?2001。

    2  试验方法

    2.1  色谱条件

    色谱柱Hypersil C18反相色谱柱(250mm×4.0mm，5μm)，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈∶磷酸盐缓冲液(取无水磷酸氢二钠2.76g，柠檬酸1.29g，加重蒸馏水至1000ml)(20∶80，v/v)，流速1.0ml/min；柱温为20℃；紫外检测波长为254nm；进样量20μl。

    2.2  标准溶液的配制

    分别取头孢硫脒和头孢硫脒盐标准对照品适量，并稀释成含药物20mg/ml的标准贮备液，置80℃水浴中加热至挥干，再加重蒸馏水1ml溶解残渣，滤过，重蒸馏水定量至10ml。

    2.3  磷酸缓冲液配制

    精确称取无水磷酸氢二钠2.76g，柠檬酸1.29g，加重蒸馏水至1000ml以备作冲洗层析柱用。

    2.4  动物和分组［2］

    健康家兔12只，随机分为头孢硫脒组和头孢硫脒盐组，每组6只，雌、雄各半，各组动物分别按等摩尔试验剂量(头孢硫脒42.08mg/kg、头孢硫脒盐44.04mg/kg)肌肉注射给药，给药前取空白血1.0ml，给药后分别于5、10、15、30、45、60、120、180、240和300min从股动脉插管取血0.8～1.0ml，置加有肝素的试管中，在按2.5方法进行样品处理。

    2.5  血样品处理［2］

    取血样0.5ml置5ml塑料离心管中，加入20%三氯乙酸定容至1.0ml，充分振荡混匀，离心，取上清液20μl进样。

    2.6  标准曲线

    取头孢硫脒或头孢硫脒盐标准贮备液(200μg/ml)适量，分别用空白血浆稀释成50μg/ml浓度，再依次稀释成50、25、20、15、10、5、2、1.0、0.5和0.2μg/ml系列浓度，按上述血样项下方法处理后进样测定，记录色谱图、样品峰面积(A)。将测得的A与浓度C进行回归分析，测定回归方程和定量限。

    2.7  血浆回收率与精密度试验

    取空白血浆1.0ml，加入头孢硫脒和头孢硫脒盐标准液适量，配制成高、中、低3个浓度(相当于血浆中含头孢硫脒和头孢硫脒盐分别为50、5、0.2μg/ml)，每个浓度5个样本，其后处理同2.5项下。测定样品回收率。同时日内各浓度测定5次，并连续测5d，计算日内和日间精密度。

    2.8  数据处理

    通过梯形法AUC，cmax和Tmax数值直接采用试验值。各参数值以(±s)表示，SPSS10.0统计软件处理，以Matlab6.5软件计算药动学参数。

    3  结果

    3.1  色谱行为

    在选定色谱条件下测得血浆中头孢硫脒和头孢硫脒盐的色谱图(图略)，从图中可见样品的杂质和头孢硫脒及头孢硫脒盐色谱峰分离清晰，头孢硫脒保留时间约为6.2min，头孢硫脒盐保留时间约为6.5min。

    3.2  标准曲线

    分取200μg/ml头孢硫脒及头孢硫脒盐标准贮备液适量，分别用空白血浆稀释成50μg/ml浓度，再依次稀释成50、25、20、15、10、5、2、1.0、0.5和0.2μg/ml系列浓度，按上述血样项下方法处理后进样测定，记录色谱图、样品峰面积(A)。将测得的A与C进行双对数直线回归，回归方程为：

    (1)头孢硫脒

    logC=0.96269×logA-1.09368  r=0.9977

    (2)头孢硫脒盐

    logC=0.92849×logA-0.94090  r=0.9969

    定量限为0.20μg/ml。

    3.3  血浆回收率与精密度试验

    取空白血浆1.0ml，加入头孢硫脒和头孢硫脒盐标准液适量，配制成高、中、低3个浓度(相当于血浆中含头孢硫脒和头孢硫脒盐分别为50、5和0.2μg/ml)，每个浓度5个样本，其后处理同“血样品处理”项下。测定样品回收率。同时日内各浓度测定5次，并连续测5d，计算日内和日间精密度，结果见表1、2。

    3.4  药动学及相对生物利用度试验

    家兔肌注头孢硫脒或头孢硫脒盐后5、10、15、30、45、60、120、180、240和300min股动脉取血、制样、测血中药物浓度和绘制药?时关系曲线(图1)，采用Matlab计算软件计算药动学参数(表3)，并计算相对生物利用度。

    4  讨论

    头孢硫脒在不同动物和人体的药动学研究已有报道［2～5］，但头孢硫脒盐的药动学研究尚未见报道。本研究肌注头孢硫脒和头孢硫脒盐后两药平均血药峰浓度(cmax)分别为(0.106±0.034)和(0.075±0.019)mmol/L，曲线下面积(AUC)分别为(6.887±1.660)和(6.293±0.707)mmol·min/L，达峰时间(Tmax)分别为(9.697±1.753)和(10.758±3.196)min，血浆清除半衰期(T1/2)分别为(39.908±10.532)和(51.547±9.383)min。两种制剂的药?时曲线吻合良好，所得的主要药动学参数经统计学处理，P值均>0.05，无显著表1 头孢硫脒样品回收率与日内、日间变异系数表2  头孢硫脒盐样品回收率与日内、日间变异系数表3 家兔肌注头孢硫脒与头孢硫脒盐药动学参数的药?时曲线比较

    性差异，表明两种制剂药动学过程基本相同。同时，头孢硫脒与头孢硫脒盐比较的相对生物利用度为109.4%，头孢硫脒的生物利用度略高于其盐，但未表现统计学差异，表明家兔肌注给药头孢硫脒与其盐为生物等效性制剂。    本结果表明，两种制剂药动学过程基本相同并为生物等效性制剂。另外，头孢硫脒合成工艺步骤少于头孢硫脒盐，原料成本低于头孢硫脒盐，因此，选择头孢硫脒优于其盐制剂。

【】
  ［1］ 戴自英，汪复，张志林，等. 硫脒头孢菌素的实验和临床研究［J］. 上海医学，1978，1：32～36.

［2］ 李忠思，张小娜，陈方，等. HPLC法测定头孢硫脒大鼠体内分布浓度及其药动学研究［J］. 抗生素杂志，2005，30(16)：611～616.

［3］ 曾衍霖，江乃雄，倪素元，等. 药物代谢动力学研究(I)硫脒头孢菌素［J］. 药学学报，1979，14(10)：587～592.

［4］ 鲁澄宇，许卫铭，陈方，等. HPLC法测定头孢硫脒在家犬体内的浓度及其药动学［J］. 中国临床药与学，2006，11(5)：578～581.

［5］ 黄民，曾桂雄，黄丽慧. 头孢硫脒注射液的人体药代动力学及绝对生物利用度研究［J］. 中国抗生素杂志，2003，28(4)：252～253.