骨风宁片中羟基红花黄色素A的含量测定

【摘要】  　　目的：建立骨风宁片中羟基红花黄色素A的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法(HPLC)，Shim?packC18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，以甲醇-0.4%磷酸溶液(32：68)为流动相，检测波长为403nm，流速1.0ml/min。结果：羟基红花黄色素A在0.1032-0.516μg范围内呈良好的线性关系，r=0.9999，平均回收率98.517%，RSD为1.730%。结论：本方法简便、准确，可作为骨风宁片中羟基红花黄色素A的定量分析方法。

【关键词】  骨风宁片；羟基红花黄色素A；高效液相色谱法

　　骨风宁片是由重楼、威灵仙、黄芪、丹参、红花等11味中药组成的复方制剂，具有解毒化瘀，活络止痛等功效。本文采用高效液相色谱法(HPLC)对羟基红花黄色素A进行了含量测定。方法简便，准确，专属性强。

　　1  仪器与试药

　　1.1  仪器  高效液相色谱仪(日本岛津)，LC?10ATVP型，SPD?10AVP紫外检测器，7725i手动进样器，紫外分光光度仪，UV?3000日本岛津。

　　1.2  药品及试剂  羟基红花黄色素A对照品，批号：111637?200502,供含量测定用，由药品生物制品检定所提供，甲醇，色谱纯，其它试剂均为分析纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  高效液相色谱法条件与系统适用试验  Shim?pack C18(150mm×4.6mm,5μm)；以甲醇-0.04%磷酸溶液(32：68)为流动相；检测波长为403nm。理论板数按羟基红花黄色素A峰应不低于3000。

　　2.2  供试品溶液的制备及方法学考察

　　2.2.1  对照品溶液的制备  精密称取羟基红花黄色素A对照品适量，加25%甲醇制成每1ml含25.8μg的溶液，即得。

　　2.2.2  供试品溶液的制备  取本品10片，除包衣，精密称定，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25%甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率25kHz)40min，放冷，再称定重量，用25%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

　　2.2.3  阴性对照溶液制备  按供式品溶液制备时的取样量折算成处方中除红花外其它药材的取样量，按制法制成样品，再按供试品溶液的制备方法制成阴性对照液。

　　2.2.4  检测波长的确定  取对照品溶液适量，照紫外分光光度法测定，在200～700nm波长处进行扫描，从扫描图中可见羟基红花黄色素A对照液在403nm处有最大吸收。参照《中国药典》2005年版红花含量测定项下测定，确定检测波长为403nm［1］。

　　2.2.5  测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

　　2.3  线性关系考察  分别精密吸取羟基红花黄色素A对照品溶液(0.0258mg/ml)4、8、12、16、20μl注入液相色谱仪，测定，以峰面积积分值为纵坐标，羟基红花黄色素A对照品的进样量为横坐标，绘制标准曲线，结果回归方程为：y=-10770.9433+1512262.9x，相关系数r=0.9999，线性范围0.1032-0.516μg。

　　2.4  稳定性试验  取同一供试品溶液，每隔一定时间进样1次，以峰面积的相对标准偏差反映样品的稳定性，结果RSD=0.9%。说明，本品在24h内测定结果稳定。

　　2.5  精密度试验  取羟基红花黄色素A对照品溶液(0.0258mg/ml)，连续进样5次，每次10μl，记录峰面积。以积分峰面积测定结果的相对偏差反映方法的精密度，结果RSD=0.9%。

　　2.6  重现性试验  取同一批号样品(20050701)，依法独立测定5次，测定结果RSD=1.3%。

　　2.7  回收率试验  取已知含量的样品适量(批号为20050701，平均片重0.3982g，含量0.3881mg/片)5份，研细，精密称定，分别精密加入羟基红花黄色素A对照品溶液，按正文含量测定方法操作，结果见表1。

　　2.8  样品含量测定  取5批样品，按正文含量测定方法操作，依法测定，结果见表2。

　　表1  加样回收率测定结果（略）

　　表2  5批样品含量测定结果（略）

　　3  讨论

　　3.1  红花虽不是本方君药，但其功能主治与本品一致，主要成分为羟基红花黄色素A和山奈素。本方法选择羟基红花黄色素A为检测成分，检测5批成品含量，结果表明该方法稳定可行，方法简便准确。

　　3.2  (1)提取溶剂的选择：分别用25%甲醇、无水乙醇、95%乙醇作为提取溶剂进行提取，结果表明，甲醇提取效果最好。(2)提取时间的选择：采用超声方法进行提取，选择不同时间提取后，进行检测，结果表明40min即可提取完全。(3)流动相的选择：曾采用甲醇?乙腈?0.7%磷酸溶液(26：2：72)和甲醇?0.4%磷酸溶液(32：68)为流动相，结果后者分离效果优于前者。

　　3.3  本方法准确灵敏，可作为骨风宁片中的羟基红花黄色素A的定量分析方法，为进一步制定骨风宁片中质量标准提供了依据，并对含羟基红花黄色素A的其他产品的检测也具有一定的价值。

【参考】
  　　［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.北京：化学出版社，2005.

　　［2］苗明三，李振国.实用中药质量控制技术［M］.北京：人民卫生出版社，2000.

　　［3］丁丽霞，常新全.中药活性成分分析手册［M］.北京：学苑出版社,2002.

　　［4］高学敏.中药学［M］.北京：人民卫生出版社,2006.