桂枝四逆散抗疲劳作用的实验研究

【摘要】  目的：观察桂枝四逆散对小鼠耐缺氧能力和对小鼠抗疲劳实验作用的影响。方法：将实验动物分为大、小 2个剂量组进行灌胃给药，对照组给予等体积生理盐水，14 d 后进行多项指标检测。结果：桂枝四逆散可提高小鼠抗缺氧、 游泳、转棒的能力，延长小鼠的存活时间，并具有明显的抗疲劳作用。结论：桂枝四逆散对增加心肌供血及耐缺氧抗疲劳有确切作用，值得临床研究应用。

【关键词】  桂枝四逆散；抗缺氧；疲劳；小鼠

   桂枝四逆散具有疏肝行气，调和阴阳的功能，临床上用于改善亚健康状态所致的疲劳症状。经 426 例亚健康状态人群服用，有显著的抗疲劳作用。该动物实验观察旨在进一步验证并探讨中药复方的药效及其机理，为临床提供更加确切用药依据。

    1    材料与方法

    1.1    材料

    1.1.1    动物及分组

    Wistar 小鼠，147 只，体重（20±2）g，雌雄兼用，由山东医学研究院实验动物中心提供。随机分为 3 组，每组 49 只，即正常对照组、中药大剂量组、中药小剂量组。

    1.1.2    药物

    桂枝四逆散方药组成：柴胡、枳实、桂枝、白芍、甘草、大枣、生姜。由山东中医药大学中鲁制剂室提供 100% 水煎剂（每 mL 含原生药 1 g），4℃ 冰箱保存备用。

    1.2    实验方法

    1.2.1    给药方法

    中药大剂量组灌胃 10 g·kg-1 ·d-1，中药小剂量组灌胃 5 g·kg-1·d-1，日 1 次。正常对照组给等体积生理盐水。连续 14 d，15 d 晚开始禁食不禁水，16 d 收集标本备用。

    1.4.2    观察项目及检测方法。

    1.4.2.1    小鼠血清 LDH 活性检测    小鼠尾静脉采血，用 2，4 - 二硝基苯肼比色法测定各鼠血清 LDH 活性。

    1.4.2.2    小鼠运动后血乳酸值的检测    让小鼠在（28±2）℃ 水中游泳 30 min。泳前安静时及泳后 20 min、50 min，各鼠分别采尾血一次。用乙醛 - 对羟基联苯法测定血乳酸含量。

    1.4.2.3    小鼠肝糖原和肌糖原含量的测定    将小鼠断头处死，立即取肝脏和后肢肌肉，用三氯醋酸沉淀蛋白，用蒽酮比色法测定糖原含量。

    1.4.2.4    小鼠血色素的测定    小鼠眼眶取血，血红蛋白含量采用比色法测定。

    1.4.2.5    小鼠的耐缺氧能力实验    把小鼠分别置于经容量标定的 300 mL 广口瓶中，瓶内置 20 g 钠石灰以吸收 CO2 和水分，瓶盖涂以凡士林密封，记录小鼠的死亡时间，即存活时间。

    1.4.2.6    小鼠游泳实验    在小鼠尾部加 10% 体重的负荷，放置于水温（26±1）℃，水深 15 cm 的游泳缸内，观察小鼠的游泳时间，以小鼠沉到水底 6 s 内不再游出水面为准。

    1.4.2.7    小鼠转棒实验    把小鼠放置于电动转棒上（转速为 2 档，20 r/min）以 1 min 内不落下为准。

    1.5    统计学处理

    全部数据均以均数±标准差表示，组间比较采用 t 检验。

    2    结    果

    2.1    小鼠血清 LDH 活性检测

    见表 1。

    中药大小剂量组均能显著提高小鼠 LDH 活力，且中药大剂量组明显优于小剂量组。

    2.2    小鼠运动后血乳酸值的影响

    见表 2。

    正常对照组及中药组在运动前及运动后 20 min 的血乳酸值在组间比较无显著差异（P > 0.05），而在运动后 50 min，中药组的血乳酸值比对照组显著降低，表明中药能降低小鼠运动后血乳酸水平，且中药大剂量组优于小剂量组。

    2.3    小鼠肝糖原和肌糖原含量的测定

    见表 3。

    结果表明，中药组的肝糖原和肌糖原比对照组明显增加，但中药大小剂量组之间无显著差异。

    2.4    小鼠血色素的测定

    见表 4。

    中药组比正常对照组有升高血色素的作用，但无显著性差异，P > 0.05。

    2.5    小鼠的耐缺氧能力实验

    见表 5。

    中药组较之正常对照组可明显提高小鼠耐缺氧，延长存活时间，效果显著，中药大剂量组优于中药小剂量组。

    2.6    小鼠游泳实验

    见表 6。

    中药组可显著延长小鼠负重游泳持续时间，有明显的抗疲劳作用。中药大剂量组优于中药小剂量组。

    2.7    小鼠转棒实验

    见表 7。

    中药组可显著延长小鼠转棒时间，有明显的抗疲劳作用。中药大剂量组优于中药小剂量组。

    3    讨    论

    本实验结果显示，中药复方桂枝四逆散煎剂能增强小鼠血清 LDH 活性，降低小鼠运动后血乳酸值水平，增加小鼠肝糖原和肌糖原含量，提高小鼠血色素含量，延长小鼠耐缺氧存活时间和小鼠游泳转棒存活时间。机体运动后，体内堆积过多乳酸是引起运动性疲劳的一个重要原因，而血乳酸的降低与消除有赖于 LDH 的参与。通过提高 LDH 活力以降低血乳酸水平是提高机体抗疲劳能力的途径之一。本实验结果表明，桂枝四逆散水煎剂能明显地增强 LDH 活力，有效地降低运动后血乳酸水平。另外，糖原贮备的提高有利于机体耐力速度的提高，并减少蛋白质和含氮化合物的分解代谢，降低血清尿素氮的形成。实验结果表明，桂枝四逆散能有效地提高小鼠肝糖原和肌糖原的贮备能力，增强机体对运动负荷的适应能力。机体在缺氧状态下存活时间反映其心肌耗氧量和心肌耐缺氧能力，心肌耐缺氧能力与机体应激能力和储备能力密切相关，随着年龄的增长，心肌耐缺氧能力降低，桂枝四逆散水煎剂能延长小鼠耐缺氧存活时间，提高小鼠耐缺氧能力，保护缺氧状态下心肌和大脑，提高小鼠机体抗应激能力。

    桂枝四逆散由桂枝汤与四逆散合方组成。桂枝汤是“仲景群方之冠”，有滋阴和阳，调和营卫之功。四逆散是调和肝脾的代表方剂，具有疏肝解郁，调气机，和肝脾的功效。方中桂枝有扩张脑血管和冠状动脉的作用；能使心肌耗氧量降低，提高心肌工作效率；此外柴胡，枳实有抗缺氧作用。芍药可增加冠脉流量，降低心肌耗氧量，对心肌缺氧有保护作用[1]；甘草，大枣在《神农本草经》属中品，有“益精、轻身”之用。综上所述，桂枝四逆散水煎剂对增加心肌供血及耐缺氧抗疲劳均具有确切的作用，且相互配伍协同，效果更佳。该煎剂具有一定的抗耐缺氧能力和抗疲劳作用，其作用机理有待进一步探讨。

【】
  〔1〕曲京峰. 中药学〔M〕. 济南:山东大学出版社, 1996. 32