高效液相色谱法测定普卢利沙星的含量

【摘要】  目的 建立普卢利沙星的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法；Alltima C18柱(150mm×4.6mm，5μm)；乙腈∶0.005mol/L磷酸二氢钠溶液(取0.005mol/L磷酸二氢钠溶液100ml，加三乙胺0.2ml，用磷酸调节pH值至6.0)(40∶60)为流动相；流速1.0ml/min，检测波长278nm。结果 普卢利沙星在12.8～204.1μg/ml浓度范围内呈现良好的线性关系，r=0.9999。结论 该方法快速、简捷、准确都高，适用于普卢利沙星的含量测定。

【关键词】  普卢利沙星 含量测定 HPLC法

    Content determination of prulixacin by HPLC

      ABSTRACT  Objective  A high performance liquid chromatographic method for the content determination of prulixacin was developed.  Method  The HPLC was performed on a column of Alltima C18 (150mm×4.6mm, 5μm), using the mobile phase of 0.005mol/L sodium dihydrogen phosphate (added with 0.2ml triethylamine and adjusted to pH 6.0 by phosphoric acid)∶acetonitrile (60∶40) at the detection wavelength of 278nm with the flow rate of 1.0ml/min.  Results  The calibration curve was linear in the range of 12.8～204.1μg/ml (r=0.9999) for prulixacin.  Conclusion  The method was simple, quick and accurate for content determination of prulixacin.

    KEY WORDS  Prulixacin;  Content determination;  HPLC

     普卢利沙星是由日本新药公司与明治制果公司共同开发研制的第三代氟喹诺酮类广谱抗菌药物，对革兰阳性菌和革兰阴性菌有广谱抗菌作用，对铜绿假单胞菌的MIC90为0.39μg/ml，远超过其他同类产品的抗菌活性［1，2］。普卢利沙星原料药的含量测定已有报道［3，4］，本文建立普卢利沙星原料药的含量测定方法，操作简便，结果准确。

    1  仪器和药品

    高效液相色谱仪Agilent 1100 Series，美国Agilent公司；HW?2000色谱工作站2.01版，南京千谱软件有限公司；色谱柱Alltima C18(150mm×4.6mm，5μm)，美国Alltech公司；分析天平HA?120M型(0.0001)，日本AD公司。所用试剂均为色谱纯或分析纯。 普卢利沙星对照品(含量99.85%)和普卢利沙星(批号040630，040705，040710)由北京某药企提供。

    2  方法学研究与含量测定

    2.1  色谱条件

    以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈∶0.005mol/L磷酸二氢钠溶液(取0.005mol/L磷酸二氢钠溶液100ml，加三乙胺0.2ml，磷酸调节pH至6.0)(40∶60)为流动相；流速1.0ml/min，检测波长278nm。

    2.2  线性试验

    精密称取普卢利沙星20.41mg，置100ml容量瓶中，加流动相适量，超声处理使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取溶液5、2.5、1.25、0.62、0.31ml置10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，各取溶液20μl进样， 按照上述方法测定，以峰面(下转第S2页)(上接第  页)积为纵坐标，以样品浓度为横坐标，进行线性回归，得到回归方程：

    Y=48663X+10927  r=0.9999

    结果表明，普卢利沙星在12.8～204.1μg/ml浓度范围内其峰面积与浓度有良好的线性关系。

    2.3  空白实验

    精密称取普卢利沙星50.0mg及对照品50.0mg，分别用流动相溶解并制成每ml约含50μg的溶液，作为样品溶液和对照品溶液。取流动相作为空白对照，按上述色谱条件测得HPLC图，普卢利沙星的保留时间为6.91，空白对照液对测定无干扰。

    2.4  精密度试验

    精密量取上述对照品溶液(50.01μg/ml)20μl，重复进样6次，求得普卢利沙星峰面积的RSD为0.17%，表明仪器精密度良好。

    2.5  回收率试验

    精密称取普卢利沙星约10mg，置100ml容量瓶中，加流动相适量，超声处理使溶解并稀释制成每ml约含50μg的溶液；设此浓度为100%，同法配制120%的高浓度溶液和80%的低浓度溶液。每个浓度各测3次，用外标法样品的百分含量，计算普卢利沙星的平均回收率为99.90%，RSD为0.51%。

    2.6  重复性试验

    精密称取同一批号普卢利沙星6份和对照品2份，分别置100ml容量瓶中，加流动相适量，超声处理使溶解并稀释制成每ml约含50μg的溶液。精密量取20μl进样，同一实验条件下测定各份溶液的含量，计算得到普卢利沙星的平均含量为99.84%，RSD为0.41%。

    2.7  含量测定方法

    精密称取普卢利沙星10mg，置100ml容量瓶中，加流动相适量，超声处理使溶解并稀释制成每ml约含50μg的溶液，立即量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取普卢利沙星对照品约10mg，同法测定。按外标法以峰面积计算供试品中C21H20FN3O6S的含量，结果见Tab.1。

    3  结论

    本法简便、准确、专属性强，无溶剂峰干扰，主峰分离较好，适用于普卢利沙星含量测定。

【】
  ［1］ 方利明，金艳，魏敏吉. 氟喹诺酮类抗菌剂?普卢利沙星［J］. 医药导刊，2004，6(3)：225

［2］ Prats G, Roig C, Miro E, et al. In vitro activity of the active metabolite of prulifloxacin (AF 3013) compared with six other fluoroquinolones ［J］. Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2002,21(4):328

［3］ Kakemi K, Aoki N, Mikawa M, et al. Chemical structure, physicochemical properties and stability of prulifloxacin ［J］. Iyakuhin Kenkyu,1997,28(1):1

［4］ 绳金房，李巍，谭娅娅，等. HPLC法测定普卢利沙星的含量 ［J］. 中国抗生素杂志，2005，30(10)：594 (b)Supersolubility from direc