HPLC法测定连翘败毒丸中大黄素和大黄酚的含量

【摘要】  目的：建立连翘败毒丸的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱：SHIMADZU VP-ODS（250 mm×4.6 mm,5 um），流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（80：20，V/V），流速：1.0ml·min-1，检测波长：254nm，柱温：30℃。结果：大黄素在10.13～250.8μg·ml-1范围内线性关系良好（r =0.9996）；平均加样回收率为96.2%， RSD=1.2%（n=6）；大黄酚在10.00～250.0μg·ml-1范围内线性关系良好（r =0.9998）；平均加样回收率为96.7%， RSD= 1.3%（n=6）。结论：该方法简便易行，结果准确可靠，可适用于连翘败毒丸的质量控制。

【关键词】  高效液相色谱法 连翘败毒丸 大黄素 大黄酚 含量测定

    Determination the content of Emodin and Chrysophanol in Lianqiao baidu Pills by HPLC

    LI Ya-rong  Wang-Shu

    （Jilin Institute for Food and Drug Control   Jilin Jilin   132001）

    【Abstract objective】To establish a HPLC method for determination the content of emodin and chysophanol in. lianqiao baidu  Pills METHOD: The shimadzu VP-ODS C18(250 mm×4.6 mm,5 um) was used, the mobile phase was methanol-0.1% phosphoric acid solution(80:20), the column temperature was 30 ℃,the  detection wavelength was 254 nm.the flow rate was 1.0ml·min-1. RESULTS  The linear ranges of emodin and chrysophanol were at 10.13～250.8μg·ml-1 (r=0.9996) and10.00～250.0μg·ml-1 (r=0.9998) respectively, the average recoveries(n=6) were 96.2% and 96.7% with RSD 1.2% and 1.3% respeclivery. CONCLUSION  The method is simple and  accurate, it can be used for quality control of lianqiao baidu  Pills.

    【Key words】HPLC;lianqiao baidu Pills; emodin;chrysophanol; determination

    连翘败毒丸为《卫生部药品标准》第二十册（中药成方制剂）收载的品种，由连翘、金银花、大黄、苦地丁、天花粉等19味中药组成，具有清热解毒，散风消肿之功效。临床用于脏腑积热、风热湿毒引起的疮疡初起，红肿疼痛，憎寒发热，风湿疙瘩，遍身刺痒，大便秘结[1]。处方中大黄为君药之一，大黄素和大黄酚为其主要有效成分，原标准中无含量测定方法。为了更好地控制制剂的内在质量，本文采用高效液相色谱法测定连翘败毒丸中大黄素和大黄酚的含量，以期为该制剂的质量提供快速、准确的测定方法，现报告如下。

    1  仪器与试药

    LC－2010C 高效液相色谱仪，CLASS－VP 色谱工作站，紫外检测器；大黄素对照品（批号：110756-200110），大黄酚对照品（批号：110796-200310），由药品生物制品检定所提供，供含量测定用；连翘败毒丸为市售样品（呼伦贝尔哈慈制药厂，规格6g·100粒-1  批号：20061201，20061205，20070302）。甲醇为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

    2  方法与结果

    2.1 色谱条件与系统适用性试验

    色谱柱：SHIMADZU VP-ODS(250 mm×4.6 mm,5 um)；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（80：20，V/V）；检测波长：254nm；流速：1.0ml·min-1；柱温：30℃。

    2.2  溶液制备 

    2.2.1  对照品溶液的制备  精密称取经五氧化二磷减压干燥12h以上的大黄素对照品和大黄酚对照品各适量，加甲醇制成每1ml含大黄素80μg、大黄酚100μg的混合溶液，作为对照品溶液。

    2.2.2  供试品溶液的制备  取重量差异项下的连翘败毒丸，粉碎，混匀，取约1g，精密称定，置烧杯中，加水3ml，置水浴温热并搅拌使溶散，加硅藻土1g，拌匀，置100℃烘箱中，烘干。转移至锥形瓶中，并用水3ml洗涤烧杯及玻棒，洗液并入锥形瓶中，置100℃烘箱中，烘干，精密加入盐酸-乙醇（1：25）混合溶液25ml，称定重量，超声处理（功率300W，频率50kHz）10 min，置水浴上加热回流2 h，放冷，再称定重量，用盐酸-乙醇（1：25）混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液5ml，置蒸发皿中，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液[2]。

    2.2.3  阴性对照溶液的制备  取除大黄以外的处方中其余药材的十分之一量，按法制成水丸，再按供试品溶液制备方法，制成阴性对照溶液。

    2.3  专属性试验

    分别精密吸取供试品溶液、阴性对照溶液和对照品溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱图（图1）。由图1可见，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间（1.大黄素：8.973min；2.大黄酚：13.486min）的色谱峰，阴性试验无干扰。

    2.4  线性关系考察

    精密吸取对照品贮备液（大黄素：1.003mg·ml-1 ，大黄酚1.000 mg·ml-1）各适量，分别置于10ml量瓶中，加甲醇定容，配成浓度分别为大黄素：10.13、50.65、100.3、150.4、200.6、250.8μg·ml-1，大黄酚：10.00、50.00、100.0、150.0、200.0、250.0μg·ml-1的溶液，摇匀，滤过，精密吸取续滤液各10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积。以峰面积（A）为纵坐标，其浓度（C）为横坐标，经线性回归，大黄素回归方程为：A=6.28X108C-4.12X105，r =0.9996；大黄酚回归方程为：A=6.41X108C-3.96X105，r =0.9998。结果表明，大黄素在10.13～250.8μg·ml-1范围内峰面积与其浓度呈良好线性关系；大黄酚在10.00～250.0μg·ml-1范围内峰面积与其浓度呈良好线性关系。

    2.5  精密度

    取对照品溶液，重复进样5次，进样量10μl，在上述色谱条件下求得大黄素峰面积的RSD为0.6%(n=5)，大黄酚峰面积的RSD为0.9%(n=5)。

    2.6  稳定性试验

    取同一供试品溶液，在0、6、12、24、48 h分别进行测定峰面积结果，大黄素峰面积的RSD为1.1%(n=5)，大黄酚峰面积的RSD为1.9%(n=5)。

    2.7  重复性试验

    取供试品（批号20061205），共5份，分别按“2.2.2”方法制备供试品溶液，进行测定，求得大黄素含量的RSD为1.7%(n=5)，大黄酚含量的RSD为2.1%(n=5)，表明重复性较好。

    2.8  加样回收率试验

    精密称取已知含量的样品（批号20061205，大黄素含量1.63mg·g-1，大黄酚含量2.15 mg·g-1，平均装量5.913g·袋-1）适量，共6份，分别置烧杯中，分别精密加入大黄素对照品贮备液（1.003mg·ml-1）、大黄酚对照品贮备液（1.000 mg·ml-1）1.5及1.0 ml各适量，按 “2.2.2供试品溶液的制备”方法操作，依法测定，结果见表1。 表1  大黄素、大黄酚加样回收率试验

    2.9  样品含量测定

    分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定三批样品中大黄素、大黄酚峰面积，按外标法其含量（n=5），结果见表2。 表2  3批样品含量测定结果

    3  讨论

    3.2  通过对3批样品中大黄素、大黄酚的测定，结果表明大黄素最高含量为10.74mg·袋-1，最低为9.35mg·袋-1；大黄酚最高含量为12.95mg·袋-1，最低为11.61mg·袋-1。综合考虑确定限量，每丸含大黄素不得低于6.0mg，含大黄酚不得低于8.0mg。

    3.3 本方法结果准确，方法简便，重复性及回收率均理想，可以作为该制剂的质量控制方法。

【】
  [1] 卫生部药品标准中药成方制剂[S]．第二十册．1998，144．

[2] 药典[S]．2005年版，一部．613．